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 禽腦脊髓炎抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【用途】
用來(lái)檢測(cè)雞血清中的禽腦脊髓炎病毒（AEV）抗體

【試驗(yàn)原理】
禽腦脊髓炎，也稱(chēng)雛雞傳染性顫搐病，主要通過(guò)雞蛋傳播，感染雞和易感雞或成年禽之間亦可發(fā)生水平傳播。青年雞（1~4周齡）主要臨床表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、麻痹或頭頸快速震顫等癥狀，成年雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋能力下降。血清中的病毒抗體可通過(guò)酶聯(lián)免疫的方法檢測(cè)。血清中的AEV抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用ELISA方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
將滅活的AEV抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育，血清中的抗AEV抗體將與包被在微孔板上的AEV結(jié)合，形成AEV抗原-抗體復(fù)合物。然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞IgG的酶標(biāo)結(jié)合物至微孔板中，酶標(biāo)物將與AEV抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應(yīng)并生成一種有顏色的產(chǎn)物，zui后終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測(cè)定。

【一個(gè)微孔板所需的試劑的量】

Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU）              陽(yáng)性對(duì)照值設(shè)為100 EU

【結(jié)果判定及EU單位說(shuō)明】
AEV ELISA 值                        說(shuō)明
小于15EUs                            AEV抗體為陰性
15-25 EUs                             AEV抗體為弱陽(yáng)性，應(yīng)被認(rèn)為經(jīng)過(guò)免疫或暴露于AEV，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs                             AEV抗體適度陽(yáng)性
＞75 EUs                              AEV抗體強(qiáng)陽(yáng)性

【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過(guò)顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品震蕩均勻。
5. 陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調(diào)到100μl，反復(fù)吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照分別加入微孔中，每種做兩個(gè)平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復(fù)洗滌2次，在洗滌過(guò)程中防止酶標(biāo)板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復(fù)步驟7進(jìn)行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標(biāo)儀雙波讀數(shù)（405nm或410nm作為主要波長(zhǎng)，630nm或650nm為參考波長(zhǎng)），計(jì)算結(jié)果。

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