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【企業(yè)文化】

通常用靶標-核酸復合物的平衡解離常數(shù)Kd表征。Kd值越小，表明親和力越強。當使用梯度濃度的核酸與靶標共同孵育后，檢測核酸適配體-靶標復合物的濃度，按公式Y=Bmax X/(Kd + X)即可求算出Kd值。其中確定Y值的方法包括熒光成像法、熒光光譜法、流式細胞儀法、表面等離子共振法、DNA捕獲元件法和ELISA法。細菌靶標與核酸適配體結合的親和力和特異性是評價所篩選的適配體的重要參數(shù)。通常用靶標-核酸復合物的平衡解離常數(shù)Kd表征相互作用。Kd值越小，表明兩者相互作用越強。當使用梯度濃度的核酸與靶標共同孵育后，檢測核酸適配體-靶標復合物的濃度，按下述公式即可求算出Kd值。Y=Bmax X/(Kd + X)上述公式中：Y：核酸適配體-靶標復合物濃度；X：核酸濃度；Bmax：常數(shù)。Kd測定時可使用熒光標記的核酸。通過測定復合物的熒光強度求算Y值，Y值的確定有多種方法：1、熒光成像法將熒光標記的核酸與靶標的孵育混合物經離心去除未結合的適配體后，置于熒光顯微鏡下觀測，直接對帶有熒光的成像菌體計數(shù)，可求出Y值。2、熒光光譜法將核酸與靶標的孵育混合物通過離心等方法分離后，使用熒光光譜儀測定核酸-靶標復合物的熒光強度，可作為Y值。3、流式細胞儀法將孵育混合物通過流式細胞儀，測定帶有熒光標記的核酸-靶標復合物的數(shù)量。流式細胞儀可以對復合物進行定量，同時將核酸-靶標復合物與游離的核酸或靶標分離。

これは、通常、標的 - 核酸複合體の平衡解離定數(shù)Kdを特徴とする。 Kd値が小さいほど、親和性は強い。標的核酸の濃度勾配は、核酸アプタマーを検出中でインキュベートされたとき - 式Y = BmaxのX /（Kdを+ X）によれば、標的複合體の濃度をKd値を見つけるために計算されました。 Y値の測定方法としては、蛍光イメージング法、蛍光分光法、フローサイトメトリー法、表面プラズモン共鳴法、DNA捕捉要素法、ELISA法等が挙げられる。細菌標的の核酸アプタマーへの結合の親和性および特異性は、スクリーニングされたアプタマーを評価するための重要なパラメーターである。相互作用は、典型的には、標的 - 核酸複合體の平衡解離定數(shù)Kdによって特徴付けられる。 Kd値が小さいほど、2つの間の相互作用が強くなる。核酸の勾配濃度を標的とインキュベートすると、核酸アプタマー - 標的複合體の濃度が検出され、以下の式によりKd値を算出することができる。 Y = Bmax×/（Kd + X）上記式中、Yは核酸アプタマー - 標的複合體濃度、Xは核酸濃度、Bmaxは定數(shù)である。蛍光標識された核酸は、Kdアッセイで使用することができる。 Y値計算複雑な要件の蛍光強度を測定することにより、Yの値が決定されるいくつかの方法がある：1、蛍光イメージング法、蛍光標識された標的核酸との混合物は、未結合アプタマー配置された蛍光を除去するために遠心分離しインキュベートY値は、顕微鏡下で蛍光を用いて撮像した細胞を直接観察することによって得ることができる。蛍光強度標的複合體Yの値として使用することができる - 図2に示すように、混合物をインキュベートし、標的核酸と蛍光分光法は、遠心分離または蛍光分光計を用いて、核酸アッセイは、等により分離しました。フローサイトメトリーインキュベーション混合物をフローサイトメーターに通し、蛍光標識した核酸 - 標的複合體の量を決定した。フローサイトメーターは、核酸 - 標的複合體を遊離核酸または標的から分離しながら複合體を定量することができる。

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